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技術(shù)文章
更新時(shí)間：2022-07-19
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培養(yǎng)基是生物細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)的重要營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。動(dòng)物細(xì)胞在生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)主要采用懸浮培養(yǎng)方式，用于懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要有以下幾種：
一、平衡鹽溶液：
平衡鹽溶液簡(jiǎn)稱(chēng)BSS,它在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中主要為細(xì)胞提供微量的無(wú)機(jī)鹽，起調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH、維持滲透壓平衡等作用。常用來(lái)作為洗滌液或配置稀釋培養(yǎng)基使用。實(shí)驗(yàn)中常用的平衡鹽溶液有NaCl溶液，Hanks，Earle’s平衡鹽，PBS緩沖液等。
一般情況下，配制細(xì)胞消化液或者洗滌細(xì)胞時(shí)會(huì)采用Hanks或PBS，因?yàn)檫@兩種溶液中幾乎不含鈣、鎂離子，可以減少細(xì)胞的粘附性。在密閉的培養(yǎng)器內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，多數(shù)則采用Hanks’溶液。
幾種常用的平衡鹽溶液配置方案（g/L）
| 名稱(chēng) | 無(wú)Ca2+Mg2+PBS | 含Ca2+Mg2+PBS | Earle’s | Hanks’ | D-Hanks’ |
| ＮaCl | 8.00 | 8.00 | 6.80 | 8.00 | 8.00 |
| KCl | 0.20 | 0.20 | 0.40 | 0.40 | 0.40 |
| CaCl2 | - | - | 0.20 | 0.14 | - |
| MgCl26H2O | - | 0.1 | - | - | - |
| MgSO47H2O | - | - | 0.20 | 0.20 | - |
| Na2HPO4 | 1.15 | 1.15 | - | 0.048 | 0.048 |
| NaH2PO42H2O | - | - | 0.14 | - | - |
| KH2PO4 | 0.20 | 0.20 | - | 0.06 | 0.06 |
| NaHCO3 | - | - | 2.20 | 0.35 | 0.35 |
| 葡萄糖 | - | - | 1.00 | 1.00 | - |
| 酚紅 | - | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
二、動(dòng)物體液、動(dòng)物組織提取液
這類(lèi)培養(yǎng)基主要包含血清、淋巴液、水解蛋白等。其中血清和水解乳蛋白是實(shí)驗(yàn)中使用較多的培養(yǎng)基添加劑，同時(shí)也是細(xì)胞培養(yǎng)基中的主要營(yíng)養(yǎng)成分，常使用的血清主要有胎牛血清和新生牛血清。雖然血清的營(yíng)養(yǎng)成分較高，但是由于其內(nèi)部成分較為復(fù)雜，容易導(dǎo)致下游產(chǎn)物的分離、純化工序繁瑣。所以市場(chǎng)上逐漸出現(xiàn)合成型培養(yǎng)基，比如MEM、DMEM、PRMI1640等.
三、合成細(xì)胞培養(yǎng)基
合成細(xì)胞培養(yǎng)基是根據(jù)血液及細(xì)胞組成成分的研究，確定營(yíng)養(yǎng)配比，將細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的微生物、氨基酸、微量元素及平衡鹽溶液等安一定比例配比所研發(fā)出的營(yíng)養(yǎng)組合型培養(yǎng)基。此類(lèi)培養(yǎng)基廣泛適用于培養(yǎng)瓶、搖瓶細(xì)胞培養(yǎng)器和生物反應(yīng)器等實(shí)驗(yàn)設(shè)備中。常用合成型細(xì)胞培養(yǎng)基配方可參考下表：
合成細(xì)胞培養(yǎng)基的配比表（mg/L）
| 成份（mg/L） | BEM | DMEM | DMEM/F12 | 199 | MEM | RPMI1640 |
| 四水硝酸鈣 | - | - | - | - | - | 100 |
| 氯化鈣 | 200 | 200 | 116.6 | 200 | 200 | - |
| 硫酸銅 | - | - | 0.0013 | - | - | - |
| 九水合硝酸鐵 | - | 0.1 | 0.05 | 0.70 | - | - |
| 七水合硫酸亞鐵 | - | - | 0.417 | - | - | - |
| KCL | 400 | 400 | 311.8 | 400 | 400 | 400 |
| 六水合氯化鎂 | - | - | 28.64 | - | - | - |
| 無(wú)水硫酸鎂 | 97.67 | 97.67 | 48.84 | 97.67 | 97.67 | 48.84 |
| 氯化鈉 | 6800 | 6400 | 6999.5 | 6800 | 6800 | 6000 |
| H2NaO4P | 121.7 | 108.7 | 54.35 | 121.74 | 121.74 | - |
| Na2HPO4 | - | - | 71.02 | - | - | 800 |
| 七水合硫酸鋅 | - | — | 0.432 | - | - | - |
| L-鹽酸精氨酸 | 21 | 84 | 147.5 | 70 | 126 | 200 |
| L-胱氨酸鹽酸鹽 | 15.65 | 63 | 31.29 | 26 | 31.29 | 65.15 |
| L-谷氨酰胺 | 292 | 584 | 365 | 100 | 292 | 300 |
| 甘氨酸 | - | 30 | 18.75 | 50 | - | 10 |
| L-鹽酸組氨酸 | 15 | 42 | 31.48 | 21.88 | 42 | 15 |
| L-異亮氨酸 | 26 | 105 | 54.47 | 40 | 52 | 50 |
| L-亮氨酸 | 26 | 105 | 59.05 | 60 | 52 | 50 |
| L-鹽酸賴(lài)氨酸 | 36.47 | 146 | 91.25 | 70 | 72.5 | 40 |
| L-甲硫氨酸 | 7.5 | 30 | 17.24 | 15 | 15 | 15 |
| L-苯丙氨酸 | 16.5 | 66 | 35.48 | 25 | 32 | 15 |
| L-絲氨酸 | - | 42 | 26.25 | 25 | - | 30 |
| L-蘇氨酸 | 24 | 95 | 53.45 | 30 | 48 | 20 |
| L-丙氨酸 | - | - | 4.45 | 25 | - | - |
| L-谷氨酸 | - | - | 75 | - | 20 | |
| L-門(mén)冬酰胺 | - | - | 7.5 | - | 50 | |
| L-門(mén)冬氨酸 | - | 6.65 | 30 | - | 20 | |
| L-鹽酸半胱氨酸 | - | - | 17.56 | 0.11 | - | - |
| L-谷氨酸 | - | - | 7.35 | - | - | - |
| L-脯氨酸 | - | - | 17.25 | - | - | 20 |
| L-羥脯氨酸 | - | - | 10 | - | 20 | |
| L-色氨酸 | 4 | 16 | 9.02 | 10 | 10 | 5 |
| L-酪氨酸 | 18 | 72 | 38.4 | 40 | 36 | 20 |
| L-纈氨酸 | 23.5 | 94 | 52.85 | 25 | 46 | 20 |
| 腺嘌呤硫酸鹽 | - | - | - | 10 | - | - |
| 腺苷酸 | - | - | - | 0.20 | - | - |
| ADT | - | - | - | 1 | - | - |
| 膽固醇 | - | - | - | 0.20 | - | - |
| 2-脫氧-D-核糖 | - | - | - | 0.50 | - | - |
| 無(wú)水葡萄糖 | 1000 | 1000 | 3151 | 1000 | 1000 | 2000 |
| 谷胱甘肽（還原型） | - | - | - | 0.05 | - | 1 |
| 鳥(niǎo)嘌呤鹽酸鹽 | - | - | - | 0.30 | - | - |
| HEPES | - | - | 3574.5 | - | - | - |
| 次yellow嘌-呤 | - | - | 2 | 0.30 | - | - |
| 亞油酸 | - | - | 0.042 | - | - | - |
| 硫辛酸 | - | - | 0.105 | - | - | - |
| 苯酚紅 | 10 | 15 | 8.10 | 20 | 10 | 5 |
| D-核糖 | - | - | - | 0.50 | - | - |
| 乙酸鈉 | - | - | - | 50 | - | - |
| 胸腺嘧啶 | - | - | - | 0.30 | - | - |
| 聚山梨酯80 | - | - | - | 20 | - | - |
| 尿嘧啶 | - | - | - | 0.30 | - | - |
| yellow 嘌-呤 | - | - | - | 0.30 | - | - |
| V-C | - | - | - | 0.05 | - | - |
| V-E | - | - | - | 0.01 | - | - |
| 1,4-丁二胺酸鹽 | - | - | 0.081 | - | - | - |
| 丙酮酸鈉 | - | 110 | 55 | - | - | - |
| D-生物素 | 1 | - | 0.0035 | 0.01 | - | 0.2 |
| V-D2 | - | - | - | 0.10 | - | - |
| 泛酸鈣 | 1 | 4 | 2.24 | 0.01 | 1 | 0.25 |
| 氯化膽堿 | 1 | 4 | 8.98 | 0.50 | 1 | 3 |
| 葉酸 | 1 | 4 | 2.65 | 0.01 | 1 | 1 |
| 肌醇 | 2 | 7.2 | 12.6 | 0.05 | 2 | 35 |
| V-K3 | - | - | - | 0.01 | - | - |
| 煙酸 | - | - | - | 0.025 | - | - |
| 煙酰胺 | 1 | 4 | 2.02 | 0.025 | 1 | 1 |
| 對(duì)氨基苯甲酸 | - | - | - | 0.05 | - | 1 |
| 鹽酸吡哆醛 | 1 | 4 | 2 | 0.025 | 1 | - |
| V-B6 | - | - | 0.031 | 0.025 | - | 1 |
| V-B2 | 0.1 | 0.4 | 0.219 | 0.01 | 0.1 | 0.2 |
| V-B1 | 1 | 4 | 2.17 | 0.01 | 1 | 1 |
| 胸苷 | - | - | 0.365 | - | - | - |
| V-B12 | - | - | 0.68 | - | - | 0.005 |
| V-A | - | - | - | 0.14 | - | - |
| pH（無(wú)碳酸氫鈉） | 5.60～6.20 | 3.20～3.80 | 5.50～6.10 | 3.90～4.50 | 5.60～6.20 | 7.20～7.80 |
| pH（加碳酸氫鈉） | 7.40～8.00 | 7.20～7.80 | 6.50～7.10 | 7.00～7.60 | 7.30～7.90 | 7.50～8.10 |
| 滲透壓（無(wú)碳酸氫鈉） | 238～263 | 238～263 | 265～293 | 238～263 | 238～263 | 225～249 |
| 滲透壓（加碳酸氫鈉） | 285～315 | 300～332 | 284～314 | 274～302 | 280～310 | 265～293 |
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