細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液有哪些？

一、細(xì)胞培養(yǎng)使用的碳酸氫鈉

碳酸氫鈉（NaHCO3）是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的緩沖液，用于在4–10%二氧化碳存在的情況下維持培養(yǎng)基的 pH 值。此外，碳酸氫鈉提供一些營養(yǎng)價(jià)值，且很少對(duì)細(xì)胞有毒。

培養(yǎng)基中碳酸氫鈉的最終濃度取決于培養(yǎng)基的配方和培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度。根據(jù)所用碳酸氫鈉的濃度，建議使用不同的 CO2 濃度。如果培養(yǎng)基配方包括：

NaHCO3（g/L）<1.5，需要濃度為4%的 CO2

NaHCO3（g/L）1.5–2.2，需要濃度為5%的 CO2

NaHCO3（g/L）2.2–3.4，需要濃度為7%的 CO2

NaHCO3（g/L）>3.5，需要濃度為10%的 CO2

二、細(xì)胞培養(yǎng)中使用的 HEPES 緩沖液

盡管碳酸氫鹽因其營養(yǎng)價(jià)值而成為常用的細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液，但與 HEPES 緩沖液相比，碳酸氫鹽的緩沖能力在生理 pH 值時(shí)有所下降。HEPES 對(duì)細(xì)胞沒有營養(yǎng)價(jià)值，但可以添加到 pH 7.2 至 7.6 的緩沖細(xì)胞培養(yǎng)基中。因此，當(dāng)需要在 CO2 培養(yǎng)箱外長時(shí)間處理細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)，添加 HEPES 可提供額外的緩沖能力。

Gibco HEPES 是一種兩性離子性的有機(jī)化學(xué)緩沖劑，被歸類為" Good "緩沖液，源于 Norman Good 博士和他的同事在1966年發(fā)現(xiàn)的一組緩沖液（Good 等人，Biochemistry 1966）。

"Good 緩沖液"（如 HEPES）具有以下特征：

l pKa 值在6.0至8.0之間

l 高溶解度

l 膜不通透性

l 對(duì)生化反應(yīng)的影響有限

l 較低的可見光和紫外光吸收率

l 化學(xué)和酶促穩(wěn)定性

l 易于制備

細(xì)胞培養(yǎng)基中 HEPES 的水平可以從 10 mM 到 25 mM 不等。在 Gibco DMEM 中，HEPES 的濃度為 25 mM。然而，在 Gibco MEM/F12 中，其濃度為 15 mM。常用的濃度為 25 mM。

三、其他細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

1.  HOCH2CH2SH

HOCH2CH2SH 它能夠清除羥基自由基（等），可作為生物抗氧化劑。羥基可溶于水并可降低揮發(fā)性。

2.氨基酸溶液

要增加培養(yǎng)細(xì)胞的活性并刺激生長，可向培養(yǎng)基中添加氨基酸添加劑。此外，添加氨基酸添加劑可提供營養(yǎng)并減輕 體外細(xì)胞的生物合成負(fù)擔(dān)。 在蒸餾水中制備，該溶液中的非必需氨基酸濃度是 MEM-α 培養(yǎng)基中濃度的100倍。

3. HAT 添加劑

稀釋后的 HAT 適合用作融合后選擇培養(yǎng)基，以去除未融合或自融合的 HGPRT-骨髓瘤細(xì)胞。  葉酸拮抗劑、氨基喋呤抑制 從頭 核苷生物合成途徑。

4. MEM 維生素溶液

向培養(yǎng)基中添加 MEM 維生素溶液可增強(qiáng)培養(yǎng)中的細(xì)胞生長和活力，并減少體外細(xì)胞的生物合成負(fù)擔(dān)。在0.85%的鹽水中制備而成，該溶液中的維生素濃度是標(biāo)準(zhǔn) MEM 培養(yǎng)基中濃度的100倍。

5.丙酮酸鈉

丙酮酸鈉通常作為額外的碳來源補(bǔ)充到細(xì)胞培養(yǎng)基中。用于細(xì)胞培養(yǎng)的 Gibco 丙酮酸鈉以100 mM（100倍）溶液的形式提供，最終濃度為 11,004 mg/L。

6.植物凝集素

植物凝集素是由紅腰豆菜豆粗提取物制成的溶液。當(dāng)以一定濃度應(yīng)用時(shí)，這種添加劑可以在體外誘導(dǎo)各種哺乳動(dòng)物單核細(xì)胞中的芽基發(fā)育。

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