CD4 磁珠是一種用于對細胞進行磁性標記的工具，可以有效地分離和純化CD4+細胞。該方法具有高磁珠結合力，操作簡便快捷，能夠獲得高純度、高得率和高活率的CD4+細胞。 使用CD4磁珠進行磁珠分選的方法如下：

一、樣本準備

1. 處理抗凝的外周血液: 使用密度梯度離心法分離外周血單核細胞(PBMC)。將外周血液樣本緩慢均勻地加入離心管中，疊加上相同體積的離心液。以1000g的速度離心20分鐘。將上清液去除，并輕輕將PBMC層轉移至新的離心管中。添加適量的緩沖液使得體積增加至所需的體積。

2. 處理組織: 使用標準的方法制備組織的單細胞懸浮液。先將組織切碎并轉移到含有蛋白酶等消化酶的緩沖液中。根據(jù)實驗需求，選擇合適的消化時間和溫度。消化完畢后，將組織塊過濾去除，并用緩沖液洗滌細胞沉淀。

二、磁珠標記

1. 細胞計數(shù): 使用細胞計數(shù)儀準確計算細胞數(shù)量。

2. 離心: 將細胞離心300g，離心時間為10分鐘，以去除上清液。

3. 重懸: 對于每1億細胞，使用80μL緩沖液將細胞重懸。

4. 磁珠添加: 對于每1億細胞，使用20μL的CD4磁珠將其加入細胞懸液中。輕輕混合使磁珠均勻分散。

5. 孵育: 將細胞懸液和磁珠混合物在2-8℃的環(huán)境中冰上或冰箱中孵育15分鐘。如果在冰上孵育，需要延長孵育時間。這一步驟是為了讓CD4磁珠與目標細胞結合。

6. (可選)染色抗體: 如果需要，可以加入熒光偶聯(lián)的CD4抗體。在2-8℃的環(huán)境中避光孵育5分鐘。

7. 洗滌: 對于每1億細胞，加入1-2mL緩沖液，并使用300g的速度離心10分鐘。去除上清液。

8. 細胞重懸: 使用500μL緩沖液將細胞沉淀重懸，并輕輕混合，使細胞均勻懸浮。

三、磁性分選

1. 放置分選柱: 將分選柱放置在分選器的磁場中。

2. 分選柱濕潤: 將適量的緩沖液加入分選柱中，充分濕潤整個分選柱的內部表面。對于xM規(guī)格的分選柱，加入500μL緩沖液;對于xL規(guī)格的分選柱，加入3mL緩沖液。

3. 加入細胞懸液: 將細胞懸液緩慢地加入分選柱中，確保細胞均勻分布在整個分選柱中。

4. 分選: CD4+細胞與磁珠結合，被吸附在分選柱上，未標記的細胞會順著緩沖液流下來。加入適量的緩沖液，直至所有液體通過分選柱。三次洗滌，每次加入適量的緩沖液，等待液體全部流盡。

5. 收集未標記細胞: 洗滌后的流出物中包含未標記的細胞。收集這部分細胞作為未標記細胞。(對于xM規(guī)格分選柱，收集3次500μL的流出物;對于xL規(guī)格分選柱，收集3次3mL的流出物)

6. 收集目的細胞: 將分選柱從分選器中取出，并將其放在合適的收集管上。加入適量的緩沖液到分選柱中，迅速用塞子推下，收集洗脫出的磁性標記的CD4+細胞。對于xM規(guī)格分選柱，加入1mL緩沖液;對于xL規(guī)格分選柱，加入5mL緩沖液。

7. (可選)進一步富集: 為了提高標記細胞的純度，可以將洗脫的部分再次進行磁性分選。使用新的分選柱，重復步驟1至6中描述的磁性分選過程。

以上就是使用CD4磁珠進行細胞磁性分選的詳細操作步驟。請注意在操作過程中保持環(huán)境的清潔和無菌，并避免磁珠暴露在強磁場之外。

 注意事項：

1. 磁珠應在2-8℃的條件下避光保存，不得冷凍。

2.  除了CD4磁珠，我們公司還提供SophMag®手動磁分選套裝，可以進一步提高磁分選效果。搭配使用，可以獲得較好的分選結果。

CD4磁珠是一種方便快捷、高效純化CD4+細胞的工具，適用于細胞分選和純化等實驗。無論是在科研還是臨床應用中，都具有廣泛的應用。需要了解更多細胞分選儀、細胞分選磁珠等相關產品請進入蘇州阿爾法生物實驗器材進行了解和咨詢。