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使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)

使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)使用傳統(tǒng)體外方法生產(chǎn)的EV的深入表征和驗(yàn)證由于需要大面積的細(xì)胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實(shí)驗(yàn)方法使用貼壁細(xì)胞生物反應(yīng)器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時(shí)間的方式同時(shí)培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細(xì)胞系，從而能夠持續(xù)生產(chǎn)大量用于下游實(shí)驗(yàn)的EV。一、生物反應(yīng)器接種、適應(yīng)和維護(hù)培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總1冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后...

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層析工藝放大需要遵循的原則

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時(shí)間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時(shí)間、層析中溶液用到的CV數(shù)和洗脫樣品CV數(shù)，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實(shí)際的應(yīng)用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設(shè)備供應(yīng)商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項(xiàng)的工藝需求；二是當(dāng)層析柱直...

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熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中PCR儀器選購技巧

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是無數(shù)研究和測試實(shí)驗(yàn)室的主要技術(shù)，涉及的領(lǐng)域包括生物醫(yī)學(xué)、基因編輯、食品微生物學(xué)測試等。熒光定量PCR技術(shù)使用熱循環(huán)來促進(jìn)一系列反應(yīng)，在這些反應(yīng)中，DNA樣本會快速、呈指數(shù)地復(fù)制，從而產(chǎn)生數(shù)百萬或數(shù)十億個序列拷貝。購買PCR儀器時(shí)，重要的是要考慮您的應(yīng)用的最終目標(biāo)、熱循環(huán)設(shè)備的準(zhǔn)確性和效率以及儀器的容量和靈活性。本文概述了PCR儀器可用的不同選項(xiàng)和功能，以幫助您選購合適的PCR儀。1.PCR與qPCR與dPCR雖然所有PCR系統(tǒng)都使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)復(fù)...

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應(yīng)用差速離心法分離外泌體的原理

外泌體是一種小的(40-100nm)細(xì)胞外膜囊泡，目前進(jìn)行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細(xì)胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細(xì)胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機(jī)制各不相同具體取決于細(xì)胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通常可以辨別出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細(xì)胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時(shí)...

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