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使用微載體生物反應器規(guī)?；瘮U增 Vero 細胞的方法

絕大多數(shù)貼壁Vero細胞擴增培養(yǎng)都是使用微載體技術在攪拌式細胞生物反應器中進行的。在這里，細胞附著在微載體上，微載體被設計成在攪拌培養(yǎng)中保持懸浮。微載體的種類很多，主要分為固體和大孔兩種，表面性質(zhì)不同。幾項研究比較了不同類型的微載體用于Vero細胞的繁殖.目前多數(shù)使用Cytodex1微載體.Cytodex1微載體是基于葡聚糖的固體微載體，顯示帶電表面，平均直徑為180μm左右。近年來，國內(nèi)生產(chǎn)的DISKS片狀載體孔徑只有15μm，單層厚度約0.44mm,可以維持較好的營養(yǎng)物質(zhì)...

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克隆抗體的特點和應用

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上，創(chuàng)建立雜交瘤技術，他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合，成為雜交細胞系，既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性，又具...

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多克隆抗體及抗體制備流程

抗體，又名免疫球蛋白(Ig)，是一種由B細胞產(chǎn)生的大型Y形糖蛋白，可在免疫防御中起主要作用?？贵w與病原體的特定分子（即抗原）發(fā)生特異性結合?？贵w以一個或者多個Y形單體存在，每個Y形單體由4條多肽鏈組成。每個Y形單體包含兩條相同的重鏈（H）和兩條相同的輕鏈（L），重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y形單體的頂部包含可變區(qū)（V），也稱抗原結合片段（F(ab)）區(qū)。該區(qū)可與給定抗原上的表位特異性緊密結合?？贵w的基本結構包含恒定區(qū)（C）和可結晶片段（Fc）區(qū)。這一區(qū)域?qū)贵w的免疫應答功能非...

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蛋白酶K的應用

近年來，隨著對蛋白酶K研究的深入，該酶的應用范圍不僅在醫(yī)療診斷及科研領域得到了十分廣泛的應用，該酶還作為替代其它作用范圍較窄的蛋白酶，主要應用于造紙、工業(yè)制革、飼料生產(chǎn)、食品加工等行業(yè)中。此外，該酶還可以替代傳統(tǒng)的通過化學方法處理原材料的方法，減少污染。在各行各業(yè)中，蛋白酶K的主要用途有：①在分離DNA和RNA的過程中，用于核酸酶的蛋白水解失活。蛋白酶K能降解與核酸結合的蛋白質(zhì)，促進蛋白與核酸的分離，因此該酶在提取高分子量的核酸時具有很大的優(yōu)勢。蛋白酶K還常被用于RNA提取過...

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什么是蛋白酶K，蛋白酶K的生產(chǎn)有哪些挑戰(zhàn)？

蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為碳源和氮源的環(huán)境中生長，說明該酶可以消化角蛋白，因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成，含有277個氨基酸，該蛋白的相對分子量~28.9kDa，蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結構研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點催化三聯(lián)體(Asp39-...

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